酵母双杂交筛选互作蛋白

酵母双杂交（Y2H）是一种常用的蛋白质相互作用筛选技术，可用于鉴定蛋白质之间的相互作用关系。其基本原理是将两个蛋白质分别融合到两个不同的转录激活子（DNA结合区和激活区）中，当两个融合蛋白质相互作用时，转录激活子得以重组，使报告基因表达。

      在酵母双杂交筛选互作蛋白的过程中，一般分为以下步骤：

      构建融合蛋白质的表达载体：首先需要构建两个表达融合蛋白质的质粒，每个质粒含有一个转录激活子和一个融合基因。其中一个质粒中搭载“鱼叉”（bait）融合基因，另一个质粒中搭载“猎物”（prey）融合基因。

      酵母双杂交：将两种表达融合蛋白质的酵母菌株进行交叉配对，使bait融合蛋白质与prey融合蛋白质发生相互作用，形成一个复合物。

      筛选：通过对生长培养基的筛选，筛选出能够生长和表达报告基因的菌落。

      验证：对所得阳性菌落进行鉴定和验证，包括测序和再次双杂交验证。

      通过酵母双杂交技术，可以鉴定蛋白质之间的相互作用关系，进而揭示蛋白质在细胞内的功能和调控机制，为生物学研究提供了重要的工具。