哺乳动物细胞表达与纯化
原核表达系统具有表达水平高、操作简单、周期短、易于大规模高密度培养、成本低等优点，而对于全长抗体和糖蛋白类生物药物来说，表达产物多肽链的折叠、二硫键的形成、糖基化的有无以及糖基化的类型常常影响表达产物的合成分泌、生物活性、体内稳定性以及免疫原性等特性。
与其它真核细胞表达系统相比，目的基因在哺乳动物细胞中表达的蛋白与天然蛋白的结构、糖基化类型和方式几乎相同且能正确组装成多亚基蛋白。
系统优势
- 无自产内毒素；
- 可以分泌表达；
- 具有复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能；
- 在分子结构、理化性质和生物学功能等方面，哺乳动物细胞表达的蛋白最接近于天然蛋白。
服务优势
- 高性价比，价格低至至8600元起；
- 货期短：最短35工作日即可交付；
- 产量高，最高可达100mg/L。
我们承诺
注：该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质，我们将按步骤收费。
服务内容
| 步骤 | 服务项目 | 服务说明 | j9九游会登录入口首页生物特色 | 周期 |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 质粒构建
|
密码子优化全基因合成 | 多载体优化 为了提高的表达成功率以及获得更高表达量，除常规N端融合表达蛋白外，我们还提供C端融合标签，在确保纯度的同时更大程度保证了蛋白的活性。 |
5-10工作日 |
| PCR扩增产物酶切连接到pSec系列、pCMV系列、pCDNA等系列载体上 | ||||
| 转化TOP10宿主 | ||||
| 获得测序正确的重组质粒 | ||||
| 2 | 小试表达
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转染级重组质粒大量制备 | 转染条件优化 设置不同的转染条件，根据检测结果，选择最优的实验条件。 |
9-11工作日 |
| 小体积瞬转HEK293、CHO 等细胞 | ||||
| 检测表达产物 | ||||
| 3 | 扩大表达与纯化
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扩大培养细胞并转染 | 多条件表达方案 根据小试表达中蛋白定位情况及最佳实验条件，针对性选择不同的细胞系进行悬浮或者贴壁扩大转染，大大提高蛋白表达量。 |
8-9工作日 |
| 通过亲和、离子交换、疏水及分子筛等多种层析方法纯化目的蛋白 | ||||
| 4 | 其他（可选）
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通过酶切去除标签 | 灵活的附加服务（可选） 提供多种附加服务，客户可根据实验需求灵活选择 |
3个工作日 |
| 所有蛋白都可以提供无菌 操作和内毒素去除服务 |
2个工作日 | |||
| 5 | 质控
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进行纯度、浓度等检查，并提供QC报告 | 详细的质控报告 为每个项目提供产品说明书及完善的质控报告 |
3-5工作日 |
| 总时间 | 25-35工作日 | |||
特色技术平台
VLPs是由多个病毒的一种或者多种衣壳蛋白自动组装形成的纳米级别的微小颗粒。VLPs颗粒不含病毒核酸，不能进行自主复制，安全性高，具有与病毒颗粒类似的整体结构。
j9九游会登录入口首页生物搭建了基于HEK293表达系统的包膜VLPs技术平台，所制备的包膜VLPs在其固有的囊泡膜上显示正确折叠的多次跨膜蛋白，展示完整的生物活性。
特色表达体系
● pSecTag2A-JT载体+HEK293细胞高效表达
- 携带有CMV强启动子，含有IgK信号肽可高效分泌表达；
- N端含有10xHis较常规6xHis在IMAC中具有更强结合能力，同时含有凝血酶位点可去除标签得到无标签蛋白；
- C端含有MYC-tag可应用于标签WB检测，较His-tag具有更强灵敏度；
- Amp抗性筛选。
案例展示
案例1：哺乳动物表达系统高表达目的蛋白
众所周知，哺乳动物细胞表达量比较低，该蛋白经过我公司的哺乳动物表达系统优化表达后，将培养基上清进行SDS-PAGE检测即可观察到目的条带，纯化后经检测，蛋白表达量高达10mg/L。该蛋白理论分子量大小为42kDa，跑胶显示有糖基化修饰，后经LC-MS/MS进一步检验得到确认。
蛋白纯化图
泳道1：穿透液
泳道2：培养基原液
泳道3：Marker
泳道4：20 mM咪唑洗脱液
泳道5：60 mM咪唑洗脱液
案例2：哺乳动物表达系统高表达全长抗体
三种全长抗体采用我公司的载体转染HEK293/CHO细胞后，经SDS-PAGE检测，可以在培养基上清中看到明显的条带，兼顾周期及产量，瞬转表达产量可达100mg/L 。
蛋白纯化图
泳道1：抗体1培养基原液
泳道2：抗体1穿透液
泳道3：抗体1洗脱液
泳道4：抗体2培养基原液
泳道5：抗体2穿透液
泳道6：Marker
泳道7：抗体2洗脱液
泳道8：抗体3培养基原液
泳道9：抗体3穿透液
泳道10：抗体3洗脱液
联系信息
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