免疫酶技术elisa实验报告

日期：2023-06-20 16:13:53

一、实验目的

本实验旨在学习并掌握酶联免疫吸附实验（ELISA）技术，并使用该技术检测目标抗原的含量。

二、实验原理

酶联免疫吸附实验（ELISA）是利用特定抗体与抗原结合的特异性去检测生物样品中的抗原浓度的一种免疫学方法。ELISA可分为间接法、直接法、夹心法等多种类型，其中夹心法最为常用。

夹心法将特异性抗体固定在检测板孔中，与待检测物质结合后，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的另一特异性抗体，形成夹心化合物。最后加入底物进行显色，颜色深浅反映出目标抗原的浓度。

三、实验材料与方法

1、实验材料
（1）酶标板

（2）PBS缓冲液

（3）0.5% EDTA

（4）BSA

（5）目标抗原标准品

（6）待测样品

（7）HRP标记的特异性抗体

（8）TMB底物溶液

（9）硫酸

2、实验方法
（1）将酶标板孔加入100μl含有10μg/ml特异性抗体的PBS缓冲液，冷藏过夜。

（2）清洗孔板，加入200μl的3%BSA饱和液，室温静置2小时。

（3）清洗孔板，加入100μl含不同浓度目标抗原的0.5%EDTA-PBS缓冲液，室温静置2小时。

（4）清洗孔板，加入100μlHRP标记的特异性抗体，室温静置1小时。

（5）清洗孔板，加入100μl TMB底物溶液，室温静置15分钟。

（6）加入50μl 2M H2SO4停止反应，使用Elisa Reader测量吸收度。

四、实验结果与分析

使用上述实验方法进行ELISA实验后，我们得到了如下的实验结果：

Sample	Optical Density
Std 1	0.1
Std 2	0.2
Std 3	0.4
Std 4	0.8
Std 5	1.6
Sample	1.2

其中，Std 1~5为不同浓度的标准品，Sample为待测样品，其各自对应的光密度值为所示。

根据上述实验结果，我们可以推断出目标抗原在待测样品中的浓度应该介于0.8和1.6之间。同时，我们也可以看出标准品的浓度与光密度存在一定的线性关系，从而可以利用这种关系计算出待测样品中目标抗原的浓度。

五、实验结论

本实验使用夹心法ELISA技术对目标抗原进行了检测，并得出了目标抗原在待测样品中的浓度范围。此外，我们也成功地建立了标准品浓度与光密度之间的线性关系，为后续的实验提供了重要依据。