抗地高辛单克隆抗体制备

日期：2023-05-19 11:47:40

抗原是触发体内免疫反应的物质，其中抗原可以是蛋白质、多糖、小分子和核酸等。制备单克隆抗体对于表达和检测目标蛋白具有重要意义。抗地高辛单克隆抗体是一种常用的单克隆抗体，下面将介绍其制备过程。

1、抗原提取

首先需要从所需的生物标本（如细胞、组织、血清等）中提取目标蛋白作为抗原。具体操作包括：

① 根据目标蛋白的特性选择合适的样品来源。

② 使用适宜的提取缓冲液进行组织或细胞的破碎，然后离心取得上清液，也可使用尿毒症肝素丝片对血清进行蛋白质分离。

③ 对蛋白质进行纯化和浓缩，以提高抗原的浓度和纯度。

2、免疫原制备

将提取出来的纯化目标蛋白质与佐剂混合，制备成免疫原。这里常用的佐剂包括弱抗原、FCA、FIA等。尤其是对于小分子抗原或表达量较低的蛋白质，可以使用自己提供的激素做为佐剂来提升免疫原的效果。

3、免疫动物的选择和免疫

通常情况下，兔子和小鼠是最常用的免疫动物，免疫前必须进行一些预实验以确定最佳免疫方案。过程如下：

① 对预定免疫动物进行血清学检测，检查是否存在自身特异性抗体，可使用例如马血球凝集素等试验进行检测。

② 规划出合适的免疫方案，包括佐剂的选择、抗原的剂量、免疫间隔时间等。并制备免疫液用于免疫动物。

③ 将免疫液注射到免疫动物体内，注射方式有肌肉注射、皮下注射等，可根据免疫动物特点选择相应注射方法。

4、融合细胞的制备

将免疫动物的淋巴细胞与恶性肿瘤细胞融合，形成杂交瘤。这一步操作需要使用40%和50%的PEG，使免疫细胞与肿瘤细胞紧密结合、融合，最后筛选出单克隆杂交瘤细胞株。

5、单克隆抗体分离和纯化

将筛选出来的单克隆杂交瘤细胞株，通过限制性稀释法进行单克隆分离和扩增，最终获得足够的单克隆抗体。对于地高辛单克隆抗体的制备，需要采用特定的亲和层析柱吸附方法，将地高辛单克隆抗体从其他组分中分离纯化。

抗地高辛单克隆抗体的制备需要仔细规划免疫方案，选取合适的免疫动物和佐剂，并在制备过程中注重稳定性和纯度。