高通量抗体筛选的均相抗体结合实验

日期：2023-06-16 14:14:02

高通量抗体筛选的均相抗体结合实验（Homogeneous Antibody Binding Assays，HABA）是利用小分子竞争性配位分析测定蛋白质与特定配体的结合特异性的技术。该技术在药物发现和研究等领域中有着广泛的应用，尤其在抗体的筛选中起到了非常重要的作用。以下将对HABA的原理、步骤及应用进行介绍。

一、原理

HABA根据小分子竞争性配位分析原理建立，即不同亲和力的分子对于共存的配合物有不同的竞争性影响。在细胞外淀粉样蛋白β（amyloid β-peptide，Aβ）的草图中，大约25%具有1-40氨基酸残基的长度。这些Aβ由两个（Aβ1-42/43）或三个（Aβ1-40/42/43）亚型组成，以及更多其他的变体。证据表明，PSEN1基因的突变会导致AD或FAD。
HABA技术中，小分子配体（例如荧光素素）与与之竞争的大分子（例如抗体）结合后，荧光素素的释放与分子的亲和力成反比。因此，一种具有高亲和力的大分子会显著降低荧光素素的释放，从而产生高度荧光信号。相反，低亲和力的大分子会释放更多的荧光素，并产生较低的荧光信号。通过这种竞争性配位分析测定，可以定量测定大分子与小分子的结合强度与特异性。同时，由于荧光素素与蛋白质的结合是可逆的，因此可以反复利用。

二、步骤

HABA技术通常包括以下步骤：

1.准备样品：将要测试的抗体样品和荧光素素标记的配体在缓冲液中混合。

2.孵育：将混合后的样品在适当的温度下孵育，以充分发生结合反应。

3.添加竞争物：添加不同浓度的某个竞争性物质，例如未标记的小分子配体或另一个抗体，以形成配体-大分子竞争反应。

4.测量荧光：通过测量荧光的强度来确定配体与大分子之间的竞争关系。高亲和力的抗体会导致配体释放得更少，从而产生更高的荧光信号，反之亦然。

5.数据分析：使用得到的数据来计算大分子的亲和力。

三、应用

HABA技术在抗体筛选中有着广泛应用。通过利用竞争性测定技术，可以高通量筛选大量不同亲和力的抗体。尤其适用于面向特定蛋白质的抗体筛选和最优抗体的优化过程。例如，对于一种新的抗体，可以通过HABA技术评估其与靶蛋白的结合亲和力，并筛选出具有最高亲和力的抗体。此外，还可以使用HABA技术评估抗体在不同条件下的稳定性、亲和力和特异性等参数。

HABA技术作为一种高通量、简便和可重复的技术方法，在药物发现、抗体工程和基础生物学研究中有着广泛的应用。它可以提供快速的决策和准确的数据，从而加速药物发现和研究过程。