外泌体中的miRNA提取

日期：2023-06-19 16:12:20

外泌体（extracellular vesicle，EV）具有信息传递和调节功能。EV中含有丰富的生物活性物质，包括蛋白质、核酸、肽类等。其中，miRNA是一类长度约为22nt的小RNA，在细胞的发育、生长、转化和毒理等过程中扮演着重要的角色。然而，由于EV中miRNA的含量很少，因此对EV中miRNA的提取是研究的关键步骤之一。以下简要介绍了目前常用的三种EV中miRNA提取方法。

方法一：商业化试剂盒

商业化试剂盒是目前最常用的EV中miRNA提取方法之一。这种方法基于慢镇静离心（ultracentrifugation）和柱层析（column chromatography）等技术，可以通过化学反应和特定试剂的选择，高效地从EV中提取miRNA。其主要优势在于操作简单、易于标准化、重复性好等方面。目前市场上销售的商业试剂盒品种丰富，价格也较为合理，因此深受广大研究者的喜爱。

方法二：超滤法

超滤法是基于膜分离技术的miRNA提取方法，可以通过在某些聚合物膜上设定特定孔径大小，将EV分离并收集所需要的miRNA。与其他方法相比，超滤法具有提取效率高、操作简单、成本低等优势，但由于需要使用较为昂贵的超滤膜和磁珠等材料，因此在实际应用中受到限制。

方法三：电泳法

电泳法是通过电场作用促进miRNA迁移的方法，通过其在电场中的运动特性，可将目标miRNA从EV中分离和提取。这种方法需要对样品进行预处理，包括低渗溶液（hypotonic buffer）处理、电泳缓冲液（electrophoresis buffer）处理等，而且仪器设备相对较为昂贵。但是，电泳法可以有效避免某些化学方法中可能存在的干扰因素，对于一些高净化纯度的样品具有较好的适用性。

在实际应用过程中，提取EV中miRNA要考虑到样品的来源和性质、试剂的选择和使用、操作的规范化等方面，以确保提取的miRNA质量和数量达到要求。同时，还需要对提取后的miRNA进行质检、纯化和定量等处理，以确保其能够满足后续的研究需求。