外泌体超速离心法提取过程
日期:2023-09-27 15:27:00
外泌体超速离心法是常用的外泌体提取方法。以下是外泌体超速离心法的提取过程:
样本收集:收集待处理的生物样本,如细胞培养上清液、血浆、尿液等含有外泌体的样本。
前处理:将收集到的样本进行前处理,包括去除细胞碎片、细胞核和大颗粒物质。这可以通过低速离心(如300g)获取上清液。
超速离心:将上清液转移到聚乙烯醇/葡聚糖等密度梯度溶液中,并进行超速离心。超速离心的条件可以根据具体实验设定,通常在1万到10万g之间离心30分钟至2小时。
液体收集:将超速离心后的上清液小心地收集至离心管底部。此时,外泌体富集在密度梯度溶液的底部层。
洗涤:使用缓冲溶液PBS对外泌体进行一至多次洗涤步骤,以去除梯度溶液残留和杂质。
再次离心:将洗涤后的外泌体悬浮液进行再次超速离心,以沉淀外泌体。
上清液去除:去除上清液,将外泌体沉淀物留在离心管底部。
重悬:将外泌体沉淀物用适当的缓冲液重新悬浮,如PBS。
储存或进一步分析:根据实验需要,可以将提取得到的外泌体样品进行储存或进行进一步的分析和实验。
外泌体提取的具体条件和步骤可能因实验设计的不同而有所差异。因此,在具体操作时,建议参考相关研究文献或专业实验方法来进行操作。
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