间接elisa实验步骤
日期：2023-10-17 15:00:15
间接ELISA是常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或抗体的存在。以下是间接ELISA实验的基本步骤：
抗原涂附：将目标抗原溶液加入到微孔板中，使其吸附在孔底表面上，通常需要在4°C下孵育过夜。
阻断：倒掉孔中的抗原溶液，然后加入一种阻断剂（如5%牛血清蛋白/BSA或1%乳清），以防止非特异性结合。孵育一段时间（如1小时）。
抗体孔：倒掉阻断剂，加入稀释好的第一抗体溶液（特异性识别目标抗原的抗体），孵育一段时间。
洗涤：倒掉孔中的第一抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤孔底，以去除未结合的抗体和其他非特异性成分。可以重复洗涤2-4次，每次洗涤需要充分。
二抗孔：加入稀释好的辣根过氧化物酶（HRP）标记的第二抗体溶液，它与第一抗体结合。孵育一段时间。
再次洗涤：倒掉孔中的二抗溶液，用洗涤缓冲液洗涤孔底，去除未结合的二抗和其他非特异性成分。重复洗涤2-4次。
底物反应：加入适当的底物液，其可以通过HRP催化产生可检测的颜色反应。孵育一段时间。
反应停止：加入停止液，停止底物的反应。这通常会改变颜色或产生一个可读的信号。
读取结果：使用ELISA读板仪测量每个孔的吸光度或荧光强度，并与标准曲线或对照样品进行比较，以确定目标抗原或抗体的含量。
以上是间接ELISA的基本步骤，实验过程中需注意实验条件、试剂稀释倍数、孔板操作、洗涤缓冲液的选择等因素。具体实验细节和条件可根据具体实验目的和试剂的要求进行优化和调整。
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