蛋白质分离并检测蛋白表达的方法

蛋白质提取 Western Blotting（WB）是一种常用的分离蛋白质并检测蛋白质表达的方法。以下是一般蛋白质提取 Western Blotting 的步骤：
1.细胞裂解：用裂解液将细胞破裂，使蛋白质裸露出来。
2.离心：离心使得细胞的碎片、DNA等杂质沉淀下来，得到蛋白质上清液。
3.测定蛋白质浓度：使用BCA或者Lowry方法等常见方法测定蛋白质的浓度。
4.电泳：将提取的蛋白质样品通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离，分离后的蛋白质可被转移到膜上。
5.膜转移：将凝胶上分离出来的蛋白质转移到聚乙烯醇基础的膜上。
6.封闭：将转移后的膜在牛奶粉中进行非特异性的封闭。
7.抗体反应：用特异性抗体与膜上的蛋白质结合。
8.检测：将特异性抗体标记上标记物检测抗体与膜上蛋白质结合的情况。
需要注意的是，蛋白质提取的具体方法需要根据不同的样本和目的进行优化和调整。常见的蛋白质提取方法包括：RIPA缓冲液、NP-40缓冲液、Tris-HCl缓冲液、SDS缓冲液等。