如何分离得到外泌体蛋白？

日期：2023-06-07 14:23:14

外泌体内部含有细胞分泌的不同种类蛋白质、mRNA、miRNA等功能分子。这些成分可以通过特定的处理策略进行分离和纯化。下面介绍几种常用的外泌体蛋白分离方法。

外泌体提纯

1、超速离心法
超速离心法是当前最常见的外泌体分离和纯化方法之一。该方法利用差速离心机（ultracentrifuge）或中速离心机（centrifuge）对细胞培养基或生物样品进行离心处理，将外泌体从细胞碎片、蛋白质颗粒和其他有机杂质中分离出来。此外，超速离心还可以通过密度梯度离心法（density gradient centrifugation）进一步将外泌体分离并纯化。

2、尺寸排除色谱法
尺寸排除色谱法利用特定的分子筛分离蛋白质和其他溶液中溶质的技术。在该方法中，采用具有不同孔径的多种柱子进行操作，根据分离物的分子量大小选择合适的柱子进行操作。通常选用具有较高分子量的纤维素、聚酰胺或硅胶等材料构成柱子。此方法能够分离出不同尺寸的外泌体，并进一步纯化外泌体蛋白。

3、亲和纯化法
亲和纯化法是利用外泌体表面蛋白与特定配体之间的亲和力进行分离（例如抗体/抗原、受体/配体等），以分离和纯化外泌体蛋白。在该方法中，利用纯化柱子将配体分布在固相上，然后将样品通过悬浮于配体溶液中，并通过洗涤剂、盐浓度等条件改变配体与目标蛋白质之间的亲和性来实现分离。这种方法适用于具有高亲和力的蛋白质，但需要特定的配体和设备，因此操作较为复杂。

4、质谱法
质谱法是一种高效、精确并且灵敏的蛋白质分析技术，用于鉴定和定量外泌体蛋白质。在分离和纯化外泌体蛋白时，可以使用各种质谱方法，例如基质辅助激光解析离子飞行时间质谱法（MALDI-TOF），液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）等。这种方法需要高度专业的技术操作，并需要特殊的设备和试剂，用于分析蛋白质组成、氨基酸序列甚至是翻译后修饰状态。

外泌体制备