酵母三杂交技术实验原理
日期：2023-07-13 16:13:57
酵母三杂交技术（yeast three-hybrid, Y3H）是常用的分子生物学实验方法，用于研究蛋白质-蛋白质相互作用。它基于酵母细胞中的转录激活因子（transcriptional activator）的特性，通过检测目标蛋白质与其他蛋白质的相互作用来筛选相互作用伴侣。
检测报告基因的表达：
结果分析：
以下是酵母三杂交技术的实验原理步骤：
构建酵母菌株：
构建一个酵母菌株，其中包含两个可表达靶蛋白（target protein）和激活域（activation domain）的融合蛋白。这些融合蛋白通过基因工程方法将其编码序列与适当的表达元件结合在一起。
酵母菌株中也含有一个报告基因（reporter gene），它的启动子区域包含识别序列（binding site）。这个识别序列可以被激活域识别并结合。
共表达被检测蛋白与靶蛋白：
引入第三个外源基因，这个基因编码一个与被检测蛋白（bait protein）相互作用的蛋白质（prey protein）。这个蛋白质会与靶蛋白形成复合物。
靶蛋白和激活域的融合蛋白同时表达，形成复合物。
检测报告基因的表达：
如果被检测蛋白与靶蛋白相互作用，它们会结合并促使激活域与识别序列结合，从而激活报告基因的转录和表达。
报告基因可以是编码可观察性标记物的基因，如荧光蛋白基因，或者编码对酵母细胞存活有影响的基因。
结果分析：
观察报告基因的表达情况，如果报告基因表达增加，则说明被检测蛋白与靶蛋白发生相互作用。
可以通过荧光显微镜观察细胞中的荧光信号，或者通过其他方法测定报告基因产物的量。
通过酵母三杂交技术，研究人员可以筛选出与目标蛋白质相互作用的结合伴侣蛋白，以进一步研究它们在细胞中的生物学功能和信号传导途径。
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