AKTA蛋白纯化步骤
日期：2023-07-28 13:35:20
AKTA是常用的蛋白质纯化系统，广泛应用于生物分子的纯化和制备。下面是一般使用AKTA系统进行蛋白纯化的步骤：
准备工作：
将需要纯化的蛋白样品预处理，如细胞破碎、超速离心等，以获得目标蛋白的提取物。
准备好所需的纯化介质和缓冲溶液：根据目标蛋白的性质选择合适的亲和层析介质、离子交换层析介质或其他纯化介质，并配置相应的缓冲溶液。
设定AKTA系统参数：
将纯化介质装填到柱子中，并将柱子安装到AKTA系统上。
设置流速、梯度程序和检测波长等操作参数，根据具体纯化方法和目标蛋白的特性进行设定。
样品加载：
将预处理好的蛋白样品注入到AKTA系统中的注射器或自动注射器中。
在设定的流速下，将样品通过柱子，使样品中的目标蛋白与纯化介质发生特异性结合。
柱洗脱：
根据纯化介质的特性和纯化策略，使用合适的洗脱缓冲溶液冲洗柱子，去除非特异性结合的杂质。
注入高浓度洗脱缓冲溶液，使目标蛋白与纯化介质解离。
方案收集：
设置合适的方案收集方式，可以按分数收集纯化的样品。
监控波长进行实时检测并根据信号强度进行分数收集。
评估纯化后的样品：
通过SDS-PAGE、Western blot等方法对纯化后的样品进行分析，评估纯化效果和目标蛋白的纯度。
具体的步骤可能会因纯化介质、目标蛋白的性质和纯化策略的不同而有所变化。因此，在进行蛋白纯化时，建议参考相关的文献和厂家提供的操作手册，并根据实际情况进行优化调整。
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