免疫组织化学检测蛋白表达方法
日期：2023-09-28 15:14:57
免疫组织化学（IHC）是常用的检测蛋白质表达的方法，它可以通过与特异性抗体结合来标记目标分子，并将其在组织切片的位置可视化。以下是IHC检测蛋白质表达的基本步骤：
取得组织样本：收集需要检测的组织样本并制作成切片。通常使用的包括组织芯片或冰冻切片等。
抗原修复：为了在切片上准确显示蛋白质分布，需要进行抗原修复处理，以恢复蛋白质在组织中的三维构象。抗原修复方法包括可以使用高压加热、微波炉加热或酶解等。
阻断非特异性结合：为了减少假阳性信号，需要对切片进行阻断非特异性结合物的处理，通常使用牛血清白蛋白（BSA）、奶粉或其他可以阻止蛋白质非特异性结合的物质。
应用初级抗体：将与目标蛋白专一结合的初级抗体滴于切片上，并在适当的条件下孵育，使其与细胞或组织中的目标蛋白特异性结合。
应用二级抗体：将标记有酶或荧光素等检测标记的二级抗体加入切片中来检测初级抗体的结合情况。常见的标记物包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP），它们能够催化底物的转化，产生可见的信号，如颜色或光信号。
显色：根据使用的检测标记类型，在适当的条件下进行显色，产生可视化的信号。例如：使用DAB作为底物，HRP可以将其氧化为可见的棕色沉淀。
洗涤：在处理完切片后，需要对其进行清洁处理，以去除未结合的抗体和标记物，最后制备步骤后可以通过镜检观察组织切片上特定位置的颜色或荧光信号，推断某些蛋白是否表达。
这是一般IHC的基本步骤，不同的实验室和试剂盒可能会有所不同，具体的操作指南应遵循实验室的标准操作规程和试剂盒的说明书。
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