T4 Polynucleotide Kinase试剂盒
日期:2023-05-31 13:39:13
T4 Polynucleotide Kinase试剂盒是一种用于DNA或RNA磷酸化修饰的试剂盒,适用于核酸分子标记、克隆及DNA测序等领域。本试剂盒基于T4多聚核苷酸激酶(T4 Polynucleotide Kinase),使未磷酸化的DNA或RNA通过与γ-32P辐射标记的ATP进行反应而被磷酸化修饰。下面将对T4 Polynucleotide Kinase试剂盒进行进一步介绍。
一、试剂组成
T4 Polynucleotide Kinase试剂盒包括:T4 Polynucleotide Kinase 酶(10U/µL)、10×T4 PNK缓冲液、10×PNK停止缓冲液、γ-32P辐射标记的ATP。
二、试剂盒使用步骤
1、将需要磷酸化修饰的DNA或RNA加入到聚丙烯酰胺凝胶中或者直接加入反应管中;
2、加入10×T4 PNK缓冲液;
3、加入5 µL γ-32P辐射标记的ATP;
4、加入1 µL T4 Polynucleotide Kinase酶;
5、37℃下反应1小时,或根据实验要求反应不同时间;
6、加入10×PNK停止缓冲液终止反应;
7、在聚丙烯酰胺凝胶上或者直接在反应管中检测磷酸化情况。
三、注意事项
1、实验前需检查T4 Polynucleotide Kinase试剂盒的有效期和储存条件;
2、使用前需要对反应体系进行物质平衡测试;
3、操作时需佩戴手套,并保护眼睛和皮肤,避免γ-32P辐射造成伤害;
4、实验后需将废弃物处理掉,包括样品、反应液等;
5、放射性试剂需要妥善保存和处理,避免对环境和人员带来危害。
四、总结
T4 Polynucleotide Kinase试剂盒是一种方便、快速、高效的DNA或RNA磷酸化修饰试剂盒,在核酸分子标记、克隆及DNA测序等领域有着广泛的应用。使用T4 Polynucleotide Kinase试剂盒需要注意操作步骤和安全事项,以确保实验结果的准确性。
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