免疫酶技术elisa实验步骤方法及报告分析

日期：2023-06-06 13:35:59

以下是一份免疫酶技术ELISA实验报告，供参考。

一、实验目的

通过建立ELISA实验方法，测定标本中特定抗原的含量。

二、实验材料

96孔板（Nunc Maxisorp）；
非特异性或特异性适配抗体；
特异性酶标记抗体；
酶标记底物；
标准品或未知样本。

三、实验方法

1、板涂覆

取出96孔板，在每个孔中加入100ul目标抗原或标准品，用洗涤缓冲液将其均匀涂覆，室温静置过夜。

2、板洗涤

倒掉孔中液体，向每个孔中加入200ul洗涤缓冲液，轻轻震荡10秒，倒掉液体，重复上述步骤3次。最后将孔中液体倒干，拍干背面。

3、板包被

向每个孔中加入200ul阻断缓冲液，室温静置2小时，再将阻断液体倒掉。

4、孔添加样本

向每个孔中加入100ul未知样本或标准品，室温静置2小时。

5、板洗涤

将孔中液体倒掉，向每个孔中加入200ul洗涤缓冲液，轻轻震荡10秒，倒掉液体，重复上述步骤3次。最后拍干背面。

6、添加酶标记抗体

向每个孔中加入100ul已经稀释好的酶标记抗体，室温静置1小时，注意避免阳性对照污染。

7、板洗涤

重复步骤5。

8、加底物

向每个孔中加入100ul酶标记底物，室温静置10-30分钟直至颜色显现。

9、反应停止

向每个孔中加入50ul反应停止缓冲液 or ASW，注意反应停止缓冲液大小必须要与酶标记底物相配套。

10、测定吸光度

用微孔板阅读器测定每个孔的吸光度值。

四、实验结果

通过比较标准品的吸光值和未知样本吸光值，计算出未知样本含量。