elisa检测的反应原理及常用方法类型?
日期:2023-06-27 15:49:01
ELISA酶联免疫吸附试验是常用的免疫学实验方法,用于检测抗体或抗原的存在和浓度。ELISA的反应原理基于抗原与特异性抗体的结合,并利用酶底物的反应产生可视化信号。
ELISA的常用方法类型包括:
直接ELISA:将待测抗原直接吸附到微孔板上,然后加入特异性酶标记的抗体与其结合。最后加入酶底物,在酶的催化下产生发色信号。根据信号强度可以定量分析抗原的浓度。
间接ELISA:将待测抗原吸附到微孔板上,然后加入特异性抗体,如一抗。随后加入与一抗结合的酶标记的二抗,再加入酶底物产生发色反应。间接ELISA具有较高的灵敏度和特异性。
竞争ELISA:将已知浓度的抗原与酶标记的抗原竞争结合特异性抗体。待测样品中的抗原会与酶标记的抗原竞争结合特异性抗体,从而影响发色反应的强度。根据信号的变化可以推断出待测样品中抗原的浓度。
间接竞争ELISA:将抗原吸附到微孔板上,然后加入特异性抗体与其结合。随后加入酶标记的对抗体,该对抗体能够与特异性抗体结合。通过对特异性抗体与对抗体结合的酶标记的检测,可以判断待测样品中抗原的浓度。
间接双抗ELISA:将特异性抗原吸附到微孔板上,然后加入预先复合的酶标记的一抗和二抗,二抗与一抗结合。通过检测酶标记的二抗的活性,可以得到特异性抗原的浓度。
ELISA方法的选择取决于需要检测的抗原或抗体以及实验的具体要求。每种ELISA方法都有其优缺点和适用范围,研究者在设计实验时需要综合考虑样品性质、目标抗原或抗体的特性等因素,选择合适的ELISA方法来进行检测。
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