人血清elisa实验的关键步骤
日期：2023-08-07 15:21:57
人血清ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用于检测特定抗原或抗体在人血清中的方法。以下是人血清ELISA实验的关键步骤：
前处理：将人血清样本离心，分离血清并转移到新的离心管中。可以使用凝胶管或离心机进行离心。
包被抗原：将待测抗原溶液添加到微孔板的孔中，并在恒温条件下孵育一段时间，使抗原吸附到孔内壁。
阻断：用一种阻断剂（例如牛血清蛋白、BSA等）封闭剩余的非特异性结合位点，防止样品中的非特异性蛋白质与孔壁结合。
加入标准品与待测样本：将已知浓度的标准品和待测样本加入到已包被的孔中，使其与孔内的抗原发生特异性结合。
洗涤：通过多次洗涤，去除未结合的蛋白质，减少干扰物的存在。
添加检测抗体：加入与待测抗原或抗体特异结合的酶标记二抗（如HRP标记的抗人IgG），并孵育一定时间，使其与结合在孔中的抗原或抗体结合。
再次洗涤：洗涤去除未结合的检测抗体。
加入底物：加入适当的底物（如TMB）反应，并在暗处孵育一段时间，使其与酶发生反应，产生可量化的信号。
停止反应：通过添加停止液（如硫酸或盐酸）停止底物的反应，阻止进一步颜色的发展。
读取结果：使用ELISA阅读器检测各孔的吸光度（OD值），并据此计算待测样本中抗原或抗体的浓度。
每个实验室可能会有一些细微的差别和优化步骤，具体操作可根据实验室的具体要求和试剂盒的说明进行调整。
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