超速离心提取外泌体的过程

日期：2023-05-16 13:20:15

外泌体（extracellular vesicles，EVs）是30-1000纳米的细胞外小囊泡，由多种类型的细胞分泌并在细胞间传递信息，具有重要的生理和病理功能。超速离心是目前提取外泌体的标准方法之一，下面将介绍超速离心提取外泌体的详细过程。

1、样品收集及预处理

首先，需要选择合适的细胞培养基或体液，并进行一定的预处理。例如，将细胞培养液或血清在2000×g离心10分钟去除细胞残渣和碎屑。对于不同的样本类型，需要采用不同的处理方法，确保样品的干净和高品质。

2、超速离心制备外泌体样品

将处理后的样品通过不同的离心步骤去除细胞碎屑、大颗粒物质和蛋白质，最终得到外泌体样品。具体步骤如下：

1、300×g离心10分钟：去除细胞碎屑和大颗粒物；

2、2000×g离心30分钟：去除大量细胞碎屑和细胞器，得到粗外泌体（EVs P1）沉淀；

3、10000×g离心70分钟：去除小型碎片和膜片，得到中外泌体（EVs P2）沉淀；

4、100000×g离心120分钟以上：去除残留蛋白和低密度颗粒物，得到纯化外泌体（EVs P3）沉淀。

注意，在每次离心后将上清液收集备用。此外，所有步骤都需要在冰箱内进行，以防止样品受热或氧化，影响外泌体的完整性和质量。

3、洗涤和浓缩外泌体

为了去除离心过程中产生的杂质和其它污染物，需要对P3沉淀进行洗涤。常用的洗涤液包括PBS等缓冲盐溶液。将P3沉淀加入PBS中，在低速离心下重新沉淀，取上清液继续沉淀重复此步骤。这样反复洗涤2-3次，最终得到较为纯净的外泌体样品。

浓缩外泌体样品是为了提高外泌体浓度和便于进一步分析。利用超滤膜或纳滤管等装置可以将外泌体样品浓缩至需要的体积。同时，为了避免外泌体的损失和污染，要确保浓缩过程中的温度和压力等参数控制合适。

4、外泌体质量评估

确定超速离心提取外泌体后，需要对其进行质量评估和表征。常见的质量评估方法包括针对外泌体特异性标记蛋白（如CD63、CD9等）的WB和ELISA检测，以及电子显微镜观察外泌体形态和大小等。此外，也可以通过纳米颗粒追踪分析仪NanoSight等设备进行粒径和分子数量的测定。

超速离心是目前提取外泌体的标准方法之一，主要依靠离心力去除细胞碎屑、蛋白质和小颗粒物，得到较干净和高品质的外泌体样品。但是，在实验设计、样品处理、离心条件和数据分析等方面均需要进行仔细和完善的规划和调整，才能获得准确和可靠的结果。