毕赤酵母表达系统的基本原理
日期：2023-07-17 16:19:10
毕赤酵母表达系统是一种常用的重组蛋白表达系统，其基本原理如下：
毕赤酵母（Pichia pastoris）是一种单细胞真菌，具有高效的蛋白合成和分泌能力。该酵母可以利用甲醇作为碳源进行生长，并在高浓度甲醇诱导下表达外源蛋白。
基因插入：将目标基因的DNA序列插入到毕赤酵母的表达载体中。通常使用可表达的质粒作为载体，其中包含启动子、信号肽、选择标记等功能元件。
转化：将重组表达载体导入毕赤酵母细胞内，通过转化方法（如电穿孔或化学法）将外源基因导入酵母细胞的核。
选择标记：通过在载体表达引入选择标记基因，如抗生素抗性基因，可以筛选出成功转化的毕赤酵母细胞。
培养与诱导表达：将筛选出来的重组毕赤酵母细胞进行培养，在适宜的温度和培养基条件下，细胞会快速繁殖。当细胞达到一定密度后，向培养基中加入甲醇来诱导目标基因的表达。
蛋白分泌与纯化：经过甲醇诱导后，目标蛋白会在毕赤酵母细胞内合成并分泌到培养基中。可以通过离心、过滤等方法收集培养基，并使用亲和层析、凝胶过滤等技术对目标蛋白进行纯化和分离。
毕赤酵母表达系统利用毕赤酵母细胞高效的蛋白表达和分泌能力，结合外源基因的插入、转化、培养与诱导等步骤，实现外源蛋白的高效表达并进一步纯化。这个系统被广泛应用于重组蛋白的生产和研究领域。
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